كشف HLA بالطريقة المصلية

كشف HLA بالطريقة المصلية

تاريخ الاختبار هو تحديد توافق الأنسجة عندما لاحظ العلماء الأجسام المضادة المتراصة الكريات البيض في مصل المرضى الذين تعرضوا لالو مولد الضد من خلال نقل الدم أو الحمل. استخدم الباحثون هذه الأجسام المضادة كواصفات نمطية فريدة للأفراد الذين حددوا خصائص مختلفة. يتم تصنيف مستضدات HLA وفقًا لأوجه الشبه البنيوية والوظيفية للفئتين الأولى والثانية. HLA-A و B و C و HLA-HLA Class A HLA-DR و DQ ، DP ، DM ، وقد تم تحديد ودراسة. هناك أيضا أكثر من 1800 أشكال متعددة.

كشف HLA بالطريقة المصلية

 جزيئات HLA من الدرجة الأولى (A ، B ، C) موجودة على مستوى معظم الخلايا والصفائح الأنوية المنواة وتظهر جزيئات الفئة الثانية (DR ، DP ، DQ) عند مستوى الخلايا البائية ، وهي خلايا عرض للمستضد مثل الخلايا التغصنية ، والخلايا المغترسة ، والخلايا البطانية. وفي جهاز المناعة ، يلعبون دورًا أساسيًا في تحديد النسل بأنفسهم. تستخدم مستضدات HLA كحاملات لظهور الببتيدات على سطح الخلية. يكتشف HLA المؤشرات المعوية عن طريق تحفيز الاستجابة المناعية المناسبة من خلال التفاعل بين مستقبل HLA للخلية T. يقع جين HLA البشري في الموضع P21.3 على الذراع القصير للكروموسوم 6 والمعروف محليًا باسم مركب MHC. المنطقة 4 ميجا. تبدو جينات HLA هي نفسها في كل فرد ، وبعبارة أخرى ، يظهر كل فرد اثنين من الأليلات من العديد من الأليلات متعددة الأشكال HLA الموروثة من الوالد على سطح خلاياها. بهذه الطريقة ، هناك احتمال ضئيل جداً أن يكون شخصان من غير الأخوة والأخوات يتمتعان بنفس قانون HLA. تعمل المستضدات HLA كمؤشر لتحديد الذات علم الأوبئة، والنزيف في عملية HLA هو بمثابة منبه للاستجابة المناعية. يستخدم نظام HLA كمؤشر وبائي لأخذ بصمات الحمض النووي (الهوية والامتناع عن ممارسة الجنس) ، وتوافق الملزمة والمستقبل ، من أجل تقليل احتمال نمو GVHD من أجل نقل صفائح الدم المتطابقة في المرضى الذين يعانون من الحرمان.

التهاب الفقار القسطي، فينيلبيوتازون بما في ذلك التهاب المفاصل الارتكاسي، الداء البطني، التهاب كبيبات الكلى والتهاب مفصلي روماتويدي يفعي ، متلازمة غودباستشار و مرض الفقاع و الذئبة الشائعة.

طرق تحديد HLA

  • تحديد مستضدات HLA من الفئة I (HLA Class I)

اختبار ميكروسيتوتكسيتي ( (Microcytotoxicity test)

كشف HLA بالطريقة المصلية

الطريقة الأولى المستخدمة لتحديد تعدد الأشكال HLA هو تكملة اللمفاوية التي تعتمد على التكامل التي وضعتها Terasaki و Mc Clelland.

في هذا الاختبار ، وهو طريقة مصلية ، مصل مضاد يحتوي على أضداد HLA مع خلايا ليمفاوية دموية مجاورة، بعد الحضانة ، تمت إضافة مصل الأرنب إليها وإعادة احتضانها. إذا كانت الخلايا الليمفاوية تحتوي على مستضد يحتوي على جسم مضاد في المصل المضاد ، سيتم تشكيل مجمع مستضد-الأجسام المضادة ، ومن ثم سيتم تفعيل المكمل. نتيجة لتنشيط النظام المتمم في غشاء الخلية ، يتم إنشاء مسام صغيرة ويتم تحلل الخلية. هذه الخلايا انحلال مرئية والعد تحت المجهر باستخدام لون حرج (يوزين، الميثيلين الأزرق).

  • تحديد مستضدات HLA من الدرجة الثانية (HLA Class II)

كشف HLA بالطريقة المصلية

كشف HLA بالطريقة المصلية

في هذه الحالات ، بما أن HLA-DR موجود على الخلايا الليمفاوية B ، يجب فصل الخلايا الليمفاوية B و T. بالإضافة إلى ذلك

يجب أيضًا أن يكون مضاد B المصل نقيًا للاستخدام مع الصفائح الدموية لامتصاص HLA-A و B و C antisera.

غير. أساسيات الاختبار مثل HLA-A ، B ، C ، وأوقات الحضانة فقط أطول. وتجدر الإشارة إلى أن فعالية الطريقة المذكورة أعلاه (الطريقة المصلية) غير مقبولة للكشف عن المستضدات من الدرجة الثانية. وبالنسبة HLA-DR ، يمكن استخدام اختبار ثقافة مزيج الكريات البيض (MLC). زراعة اللمفاويات المختلطة (Mixed Lymphocyte Culture, MLC) في هذه الدراسة ، تم التحقق من ارتباط المستضدات من الفئة الثانية وبالتحديد التشابه أو الاختلافات بين المستضدات HLA-DR و DQ و DP في اللمفاويات.

هذا الاختبار ، إذا كانت الخلايا اللمفاوية من شخصين تختلف في مستضدات الفئة الثانية مختلفة ، فإن كل خلية ليمفاوية يتم تحفيزها وتحسينها بواسطة الخلايا الليمفاوية الأخرى. لتسهيل الإدراك ، عادةً ما يعطل التفاعل عينة ما عن طريق التعرض للإشعاع أو بعض المواد (كمنشطات) ، ويستخدم الآخر كعامل رد الفعل ؛ يسمى هذا MLR اختبار اتجاه واحد. عادة ، يتم تحديد نوع مستضد الخلايا المنشطة ويحدد الفرق أو تشابه الخلايا الليمفاوية المستجيب. وبالتالي ، إذا كان المستضد من النوعين متماثلين ، فلن يتم تحفيز الخلايا سريعة الاستجابة ، ومع ذلك ، إذا كان هناك اختلاف ، يحدث التكرار اللاحق لللمفاويات اربط يمكن قياس درجة انتشار الخلايا الليمفاوية من خلال قدرة هذه الخلايا على امتصاص تیمیدین المشعة في الحمض النووي.

الاستفادة من هذه الطريقة هي السمية الميكروية microcytytoxicity) میکروسیتوتوکسیسیته .

مما يدل على نسيج أفضل للنشاط TH من الخلايا التائية استجابة لمولدات المضادات النواة من الدرجة الثانية. وعيوب هذا هي طول الاختبار MHC.

ملاحظة:

  • ينبغي تنفيذ هذا الاختبار على الفور بعد أخذ العينات.
  • إذا ﺗﻢ أﺧﺬ اﻟﻌﻴﻨﺎت ﺧﺎرج اﻟﻤﺨﺘﺒﺮ ، ﻓﺴﻴﺘﻢ إرﺳﺎل اﻟﻌﻴﻨﺔ ﻋﻠﻰ اﻟﻔﻮر إﻟﻰ اﻟﻤﺨﺘﺒﺮ ﺑﻌﺪ أﺧﺬ اﻟﻌﻴﻨﺎت.
  • ﻟﻼﺧﺘﺒﺎرات اﻟﻤﺼﻠﻴﺔ ﻟﻠﻌﻴﻨﺔ ﻓﻲ درﺟﺔ ﺣﺮارة اﻟﻐﺮﻓﺔ و علی الفور اختبار اﻟﺠﺰﻳﺌﻲ ، ﻳﺠﺐ ﺗﺨﺰﻳﻦ اﻟﻌﻴﻨﺔ ﻓﻲ اﻟﺜﻼﺟﺔ.

الموارد المختارة:

– كتاب مبادئ علم المناعة الدكتور محمد علي عصارة زادکان

–           DNA METHODS FOR HLA TYPING A WORKBOOK FOR BEGINNERS

–           Abbas A, Lichtman A: cellular and molecular Immunology, fifth edition, 2003

–           WWW. en.wikipedia.org

Leave a Reply









Call Now Button