طرق الكشف المختبرية عن المتفطرات                

طرق الكشف المختبرية عن المتفطرات                

المتفطرات هي عصيات هوائية إلزامية أو مجهرية ، سريعة الحمض ، إيجابية الجرام ، وقضيب الشكل. البكتيريا الفطرية هي التي تلزم البكتيريا داخل الخلايا التي تنمو داخل حيدات والبلاعم. هذه البكتيريا خالية من الجراثيم ، وهي متحركة وكبسولة ، وتوجد في عصيات ضيقة طويلة في الأنسجة ، ولكنها قد تكون كوكسويدية أو خيطية في الوسط الصناعي.

جنس المتفطرة

تحتوي العائلة المتفطرة الجرثومیه على جنس المتفطره الذي يحتوي على عصيات هوائية إيجابية الجرام ومحتوى GC يبلغ 62-70٪. يتم التمايز الكيميائي الحيوي للبكتيريا الفطرية عن أجناس أخرى مماثلة عن طريق تحليل الأحماض الدهنية أو حمض  الفطریات IV. تحتوي الفطريات على نوع حمض الفطريات الرابع في جدار الخلية. ومع ذلک، فإن متابعة تلطيخ نيلسون هي واحدة من أكثر الطرق شعبية ، ولكن أبسطها ، للتعرف المبكر على الفطريات. في أواخر الثمانينيات من القرن الماضي ، تم تصنيف مزرعة ميكوباكتيريوم في أربع مجموعات بناء على إنتاج الصباغ ومعدل نموها ، وهي: كروماتوجيني المنشأ ، غير كروموجيني ، سكوتر كروموجيني ، وسرطان الفطريات السريع. تنمو الفطريات السريعة في بيئات صلبة أقل من 7 أيام من مستعمرة مرئية ، ومعظم أنواع NTM تنتمي إلى هذه المجموعة. الأنواع الأخرى في مجموعات المزرعة جزء من فئة النمو البطيء. يستغرق الأمر أكثر من 7 أيام لتنمية هذه الأنواع في البيئات الصلبة ، مع عصيات السل الفطرية المعقدة وعدد من الأنواع غير السل في هذه المجموعة. يعتقد أن العديد من الأنواع البطيئة النمو مرتبطة بالأمراض لدى البشر أو الحيوانات. على عكس الأنواع البطيئة النمو ، فإن معظم الأنواع سريعة النمو تكون أقل مسببة للأمراض للإنسان وتعتبر مسببات مرضية.

طرق الكشف المختبرية عن المتفطرات

المتفطرة سبب السل (Mycobacterium tuberculosis)

السل المتفطرة عضو في مجموعة من ثلاثة أنواع على الأقل:

tuberculosis sensu stricto، M. africanum، M. canetti، M. bovis، M. caprae،

microti، M. pinnipedii، M. mungi و M. orygis.

السل المتفطرات بطيء ونمو بطيء ويجب حضنه في وسط الثقافة لمدة 3-8 أسابيع. تحدث مستعمرات السل العصوية في وسط صلب جاف و یابس ، لمدة 10 إلى 20. مدة التكاثر من الفطريات Generation time  14 إلى 15 ساعات وفي بعض المصادر تصل إلى 18. بسبب وجود الشمع والدهون في الجدار البكتيري ، يتم نقل الغذاء ببطء إلى الخلية وبالتالي فإن نمو البكتيريا يكون بطيئا.

المتفطرة غير السل (NTM)

الفطريات غير السل هي مجموعة واسعة من البكتيريا وتسمى أسماء مختلفة: غير نمطية ، غير المصنفة ، والسل ، والمحيطية. تم العثور على هذه البكتيريا على نطاق واسع في البيئة وهلم جرا. يمكن أن تنتقل إلى البشر. لا يوجد دليل على انتقال الفطريات غير السلية من الحيوان إلى الإنسان أو من الإنسان إلى الإنسان. معظم هذه الأنواع ليست مسببة للأمراض ولكنها قد تكون انتهازية في الظروف المسببة للأمراض. من ناحية أخرى ، يمكن لأنواع NTM مع الاستعمار العابر أن تصيب العينات السريرية. بسبب تشتت أنواع NTM في البيئة ، من الصعب تفسيرها. معظم الأمراض التي تسببها المتفطرات غير السل تنتج عن الميكوباكتريوم أفيوم ، المتفطرات كانساسي ، خراج المتفطرة. تجدر الإشارة إلى أن الأبحاث الحديثة أظهرت زيادة في انتشار خراج المتفطرات وأن الإصابة بهذه البكتيريا يصعب علاجها.

أعراض الأمراض الناجمة عن المتفطرات غير السل

تتزايد البكتيريا غير الفطرية بشكل سريع في حالات العدوى بالقسطرة ، والتهابات ما بعد الليزک (جراحة العين) ، والجلد والأنسجة الرخوة (خاصة في جراحات التجميل) والالتهابات الرئوية. المظاهر السريرية الأكثر شيوعا للبكتيريا غير السل هي مرض رئوي ، ولكن حالات تورط الأنسجة اللمفاوية ، والأنسجة الرخوة مثل الجلد ، وتنتشر أيضا كعدوى. غالبا ما يرى مرض الرئة الفطري غير السل في النساء بعد انقطاع الطمث والمرضى الذين يعانون من أمراض رئوية مثل التليف الكيسي والتهاب القصبات والسل الرئوي السابق. الأمراض الرئوية الناجمة عن المتفطرات غير السل توجد أيضا في الأشخاص المصابين بالإيدز والأمراض الخبيثة ، والتي يمكن أن تسببها أنواع كثيرة من المتفطرات غير السل (حسب المنطقة) ؛ المتفطرة هي كنساس. يختلف نوع وشدة الأعراض السريرية الناجمة عن البكتيريا غير السل ، ولكن هذه تشمل عادة السعال المزمن ، وغالبا ما يصاحبها البلغم القيحي والبلغم الدموي. تشمل الأعراض الجهازية للعدوى المتقدمة الضعف والتعب وفقدان الوزن. يتطلب تشخيص الإصابة بالتهاب رئوي من خراج المتفطرات الأعراض والتشوهات الإشعاعية ونتائج الاستنبات الجرثومي.

يمكن أن يكون سبب التهاب الأوعية اللمفية في هذه الأنواع من الالتهابات سلالات مختلفة من المتفطرات غير السامة. ولكن السبب الرئيسي لهذا المرض في جميع أنحاء العالم هو مجمع ميكوباكتيريوم أفيوم. معظم المرضى تقل أعمارهم عن 5 سنوات ، ولكن انتشارهم نادر الحدوث عند الأطفال الذين يتلقون لقاح BCG. مرض الأنسجة الرخوة الناجم عن الالتهابات الفطرية غير السلية تشمل الخراجات بعد الصدمة ، الورم الحبيبي لحمامات السباحة (الناجم عن M. marinum) وقرحة Buruli (الناجمة عن M. ulcerans أو M. shinshuense). غالبا ما تحدث خراجات ما بعد الصدمة بعد الحقن.

كان مرض الفطريات المنتشر شائعا في مرضى الإيدز في الولايات المتحدة وأوروبا في السنوات 1980 وأوائل 1990، على الرغم من أن انتشاره قد انخفض منذ استخدام العلاج المضاد للفيروسات الرجعية في البلدان المتقدمة. يمكن أن يحدث أيضا في الاشخاص بعد زرع الكلى.

مبادئ وتشخيص الأمراض المتفطره

تعتمد مبادئ عزل الميكوباكتيريوم على عزل الكائنات المسببة عن عينة المريض ، مثل: البلغم ، البول ، الأنسجة العظمية ، سوائل الجسم ، الدم ، إلخ ، والتي قد تتسق مع الأعراض السريرية ، والنتائج المشتبه فيها بالأشعة ، والمناعة الحالة وتاريخ المرض. يتم تشخيص مرض السل على أساس الأعراض السريرية ، ونتائج المختبر ، وعلم الأحياء الدقيقة ، وعلم الأمراض ، واختبار جلد السل والتصوير الشعاعي. في حالة المتفطرة الانتيابية غير السلية ، من الهام إثبات الأهمية السريرية للعزلات بسبب طبيعتها البيئية. لذلک، فإنه يستند إلى معايير جمعية أمراض الصدر الأمريكية American Thorasic Society ، والتي تشمل العزلة المتكررة وتحديد مسببات الأمراض وتكيفها مع الخصائص السريرية والإشعاعية.

4-1) تحديد أنواع المتفطرة

للتعرف على المتفطرات وتحديدها ، تم تصميم مجموعة من أبسط الاختبارات المعملية إلى أكثر الطرق الجزيئية وغير الجزيئية تعقيدا ، ولكل منها نقاط قوة ونقاط ضعف كثيرة. بسبب النمو البطيء للبكتيريا الفطرية والقرب من بعض الأنواع من بعضها البعض، فإن تمايز الأنواع الفطرية له تعقيداته الخاصة.

4-2) الاختبارات الميكروبيولوجية الشائعة

عندما يتم عزل سلالة المتفطرة عن العينات السريرية ، يجب تحديد النوع من أجل التشخيص النهائي وتحليله بشكل مناسب إذا لزم الأمر من وجهة نظر وبائية ، مثل انتقال العدوى من مريض إلى آخر ، أو عدوى جديدة أو تكرار. ان نكون. العزلة والتعرف الدقيق على المتفطره. من العينات السريرية المختلفة هي عملية طويلة جدا ومكلفة ومعقدة تتطلب أشخاص موهلين تأهيلا جيدا بالإضافة إلى المرافق المناسبة. مباشرة بعد الحصول على العينة السريرية ، يتم استخدام الأصباغ الخاصة مثل زیل نیلسون و فلورسنت لأول مرة في المراقبة المباشرة. تربى العينات ایضا على الوسائط المناسبة. بعد عزل العامل الممرض باستخدام عدد من الاختبارات الكيميائية الحيوية وأخيرا الاختبارات الجزيئية ، يتم إجراء تحديد كامل للأنواع.

4-3) الفحص المجهري (مباشر)

الفحص المجهري أو المباشر هام للغاية في تشخيص ومراقبة عملية علاج أمراض الفطريات وهو أبسط طريقة لتقييم عينات المرضى المصابين. من العينة المأخوذة ، يتم تحضير السبريد ثم تلوينه ، أنواع البقع هي:

زیل نیلسون مع الحراره (صامد للحمض)——–> عصیات احمر فی خلفیه لون الازرق

في الصباغة الحمضية السريعة ، تشويه أولا، ثم أخذ عينة من الكربوهيدرات الحمراء والحرارة لاختراق الصبغة. ثم صب الكحول (الإيثانول 95 ٪ والكلوريد 3 ٪) على اللطخة وإضافة اللون إلى الميثيلين الأزرق. لا تذوب الدهون في جدار الخلية الفطرية بإضافة الكحول وبالتالي تصبح حمراء ، ولكن البكتيريا السريعة غير الحمضية تفقد اللون الأحمر وتصبح زرقاء.

ینی كينين (تلطيخ بارد): في هذه الطريقة يكون تركيز الكربوهيدرات والفوشين والفينول أكثر ولا يحتاج إلى حرارة. في هذه الطريقة ، يمكن رؤية العصيات الحمراء في الخلفية الزرقاء.

اورامین رودامین (الفلوریسنت) ———-> العصية الذهبية أو البرتقالية يمكن رويتها في الظلام.

تن تیام هاک ———-> تظهر العصيدة الحمضية الحمراء باللون الأحمر على خلفية زرقاء.

غرام إيجابية في تلطيخ غرام ولكن شاحب اللون.

عدد العصوية —-> التقارير

صفر —–> لان یبین العصویه الحمض

1-2 فی کل المنزلق —-> عدد

3-9 —> + نادرا او +

10 او اکثر فی کل المنزلق —-> قلیلا او ++

1 او اکثر فی کزاویه مجهری —->  اکثر او +++

4-4) مستنبت

المعيار الذهبي للكشف عن الفطريات هو الثقافة. وتستخدم كل من وسائل الإعلام الصلبة والسائلة لزراعة المتفطرة. هناک عموما ثلاثة أنواع من الوسائط للمتفطریه:

البيئات المستندة إلى اجار ، مثل بيئة بیروک ۷H11 أو ۷H10

بيئة مرق ، مثل بيئة میدل البیروک ۷H9 أو ۷H12 أو دوبوس تونین البومین

البيئات القائمة على البيض

  • Lowenstain-jensen – ogawaوstonebrink
  • بيئة دورست
  • بيئة بتروف
  • بيئة هيرالد

في معظم المختبرات ، يكون الخيار الأول لزراعة العينات هو الوسيلة القائمة على استنبات البيض. في الثقافة ، عادة ما يتم اختبار عينات البلغم من المرضى المشتبه في إصابتهم بالسل الرئوي. لكن السل يمكن أن يحدث أيضا في أجزاء أخرى من الجسم. في هذه الحالة ، يمكن فحص حالات السل خارج الرئتين من خلال مجموعة متنوعة من العينات السريرية ، مثل البول والسائل الدماغي النخاعي والقيح والبراز والنسيج والدم ونخاع العظام.

طرق الكشف المختبرية عن المتفطرات

4-5) مستنبت البديلة

في حين أن وسط ثقافة ليفين شتاين جونسون هو الوسيلة الأكثر شعبية بالنسبة للبكتيريا الفطرية ، فقد أوصى التحالف الدولي للسل بمراعاة العديد من الوسائط البديلة.

4-6) مستنبت الصلبة

  • Egg-based – Petragnani mediumand Dorset medium
  • Middlebrook 7H10 agar
  • Middlebrook 7H11 agar
  • Blood-based – Tarshis medium
  • Serum-based – Loeffler medium
  • Potato-based – Pawlowsky medium

4-7) مستنبت السائل

  • Dubos’ medium
  • Middlebrook 7H9 broth
  • Proskauer and Beck’s medium
  • Sula’s medium
  • Sauton’s medium

4-8) مستنبت ثقافة لیوينشتاين جونسون (Lowenstein-Jensen )

مستنبت في ليو شتاين جونسون هي أفضل وسيلة معروفة لزراعة أنواع المتفطرات ، وخاصة السل المتفطرة. كما ينمو السل المتفطرة في هذه البيئة ، فإنه ينتج مستعمرات بنية تقريبا ، تشبه الحبوب (تسمى أحيانا buff، خشن و صلب). يتم تحضين هذه الوسيلة لمدة 4 اسابیع بسبب الوقت اللازم لتقسيم السل المتفطرات (20-15ساعات). في هذه البيئة هناک كمية صغيرة من البنسلين وحمض الناليديكسيک التي تمنع نمو البكتيريا إيجابية الجرام وسالبة الجرام وتقتصر على أنواع المتفطرة فقط. وجود الأخضر (malachite green) الملكيت في البيئة يمنع نمو معظم البكتيريا. الجلسرين في هذه الوسيلة يزيد أيضا من نمو المتفطرة. إذا تم تصنيع وسط الاستزراع في أنابيب المختبر ، فيجب الاحتفاظ به في مكان بارد واستخدامه لمدة شهر واحد. لزراعة الأنواع المتفطرات M. bovis، تتم إزالة الجلسرين ويضاف بيروفات الصوديوم. لها مظهر أخضر، معتم وغير شفاف.

– الاستخدامات :

  • لتشخيص الالتهابات الفطرية
  • لعزل البكتيريا الحساسة للمضادات الحيوية
  • للتمييز بين الأنواع المختلفة من المتفطرة (عن طريق دراسة مورفولوجيا المستعمرة ، ومعدل النمو ، والكيمياء الحيوية والميزات المجهرية)

عيوب مستنبت ثقافة المتفطرة

  • تعد زراعة البكتيريا لاختبار السل أكثر تعقيدا وأكثر تكلفة من إعداد مسحة البلغم والمراقبة المجهرية. وذلک لأن الثقافة البكتيرية تتطلب معدات ومرافق مختبر محددة. يمكن أن يستغرق اختبار مرض السل المتفطري والكشف عنه باستخدام الثقافة أسابيع بسبب النمو البطيء لبكتيريا السل.
  • في المتوسط ، يمكن أن تستغرق نتائج اختبار موثوق لثقافة بكتيريا السل باستخدام الطرق القياسية ما يصل إلى 4 أسابيع. كما يستغرق 4-6 أسابيع أخرى لنتائج مقاومة المخدرات. إحدى طرق تقليل الوقت هي استخدام الوسائط السائلة. في تقدم هناک آلات أوتوماتيكية لزراعة البكتيريا.

طرق الكشف المختبرية عن المتفطرات

العلاج الموصوف لمدة 14 على الأقل  بعد أسبوعين من السلسلة الأولى من اختبارات البلغم

؟ إذا كان لدى المريض في البداية ثلاثة فوارق سلبية للبلغم ولم يتعاف بعد وصفة طبية من المضادات الحيوية واسعة الطيف، وعينة واحدة إيجابية فقط في إعادة اختبار البلغم تحتوي على عينة إيجابية واحدة فقط ، فإن ذلک يتطلب تسجيل تصوير شعاعي للسل الرئوي كإيجابي.

4-8) نظام بک تک صامد للحمض (Bactec AFB system)

يسمح نظام رادیومتریک بک تک بالفصل السريع للبكتيريا الحمضية السريعة. باستخدام هذا النظام ، يستغرق نمو أنواع NTM أقل من 7 أيام. كما أنه يقلل من وقت نمو أعضاء مجمع الفطريات بنسبة 14-9 أيام. تشمل قيود الأنظمة الخلفية ما يلي: عدم وجود مستعمرات بكتيرية بسبب استخدام وسط الاستزراع السائل ، وعدم القدرة على عزل السلالات المختلفة في عينة واحدة ، وتلوث وسط الاستزراع ، والتكلفة العالية والنفايات المشعة. من المحتمل ایضا إصابة الأفراد بسبب الاستخدام الكبير لأعداد كبيرة من الإبر في منطقة المحاصيل. من أجل روية المستعمرة.

4-9) نظام MGIT (mycobacteria growth indicator tube)

يتكون نظام MGIT من أنبوب زجاجي يحتوي على 4ml  من وسط سائل بروک ۷H9 مع كاشف من السيليكون  (silicon) الفلوريسنت في أسفل الأنبوب. الكاشف يعتمد على الأكسجين ومخصب في قاع الأنبوب. مع نمو البكتيريا ، تنخفض كمية الأكسجين في الأنبوب ، وفي ضوء الأشعة فوق البنفسجية ، يظهر لون أصفر ساطع في أسفل الأنبوب وعلى سطح البيئة. في هذا النظام ، يضاف خليط Michison من المضادات الحيوية إلى البيئة لمنع نمو البكتيريا الملوثة. تضاف أيضا تخصيبات OADC إلى البيئة لتسهيل نمو الفطريات. يتم إجراء الحضانة لمدة 8 عند 37درجات مئوية. تظهر دراسات مختلفة أن حساسية هذا النظام مماثلة لحساسية بيک ، ولكنها تستغرق وقتا أطول لتنمو. على الرغم من أن معدل تلوث MGIT أعلى من الأعمال المتراكمة ، إلا أن له فوائد عدم استخدام الإبرة في منطقة العينة ، MGIT وعدم استخدام المواد المشعة وعدم الحاجة إلى معدات باهظة الثمن. عينات تحتوي على الدم. يتم تطوير طرق اختبار حساسية الدواء MGIT.

4-10) مستنبت بی فازیک (Biphasic media)

يحتوي النظام الفيزيائي septi-chek media التي تشبه مستنبت بی فازیک ، والذي يشبه وسط ثقافة الدم الفيزيائية الحيوية ، على وسائط متوسطة معدلة من میدل بیروک ۷H9 بما في ذلک لیوينشتاين جونسون و میدل بیروک ۷H11 وشوكولاتة آجار. السيطرة على التلوث بواسطة الشوكولاته آجار. يكون. بعد التلقيح والهضم ، يتم تطعيم العينة في زجاجة تحتوي على وسط استزراع سائل ويتم قلب النظام بعد ساعتين للاتصال بالوسائط الصلبة. يحضن النظام بنسبة CO2 20% من ثاني أكسيد الكربون في الغلاف الجوي لمدة 8-6 أسابيع عند 37 درجة مئوية. قبل نمو إثراء الملوثات ومثبطات مثل الجلوكوز والجلسرين وحمض الأوليک وحمض البيروكسيدل HCL ، الكاتالاز ، الألبومين ، البوليمكسين B ، تريميثيلوبريم ، يتم إضافة الخ. تشبه حساسية هذا النظام العمود الفقري ولكن الوقت اللازم لنمو الفطريات اطول.

أنظمة التشغيل الآلي المتقدمة التي لا تستخدم المواد المشعة تشمل:

نظام Bactec 9000MB ، EPS II ، MB/bac T المنظومه Bactec 9000MB ، مشابه لنظام MGIT. نظرا لأن إنتاج بعض الغازات واستهلاک الأكسجين يعكس نمو الكائنات الحية الدقيقة ، فإن نظام EPS II يقيس تغيرات الضغط في الغلاف الجوي العلوي للبيئة السائلة. في نظام MB / bac T ، ينتج نمو الفطريات عن ثاني أكسيد الكربون. نتيجة لذلک ، يتحول اللون الأخضر لأسفل الأنبوب إلى اللون الأصفر. تستخدم هذه الأنظمة وسيط میدل بیروک  ۷H9 للثقافة السائلة.

في هذه الأنظمة ، يتم تفضيلها بسبب انخفاض التلوث عبر ، انخفاض ضغط العمل في المختبر ، نقص المواد المشعة ، وتقييم أكبر للنتائج من الطرق الإشعاعية.

4-11) اختبارات النمط الظاهری المتفطره

هناک حاجة إلى اختبارات كيميائية حيوية محددة لتحديد وتمييز الفطريات. قدم المختبر الدولي لتصنيف المتفطرات الکیمیاویه العام 1974 و 1976 اختبارات كيميائية حيوية أحد عشر لتصنيف المتفطرات التي استخدمت في السنوات التي تلت هذه الاختبارات لتحديد وتمييز أنواع المتفطرات .IWGMTهذه الاختبارات الإحدى عشرة هي أيضا الحد الأدنى من الاختبارات الكيميائية الحيوية اللازمة لإدخال أنواع جديدة.

تقييم النمو في درجات حرارة ۴۵ ،۴۰ ، ۳۷ ،۳۳ ،۳۰ ، ۲۵ إنتاج الصباغ ، اختبار مقاومة أيزونيازيد 1و 10 ميكروغرام فی کل میلی لیتر، والحساسية لهيدروكسيد ثيوفين هيدروكسيد ، اختبار هيدروكسيل أمين ، اختبار حمض النيتروبنزويک، اختبار التستوستيرون ، اختبار التستوستيرون يعتبر اختبار الكاتلاز (النوعي والكمي) ، التحلل المائي ، اختبار اليوريا ، اختبار النترات ، اختبار النياسين ، اختبار آريل سلفاتاز واختبار بيرازيناميداز بعضا من أهم الاختبارات الكيميائية الحيوية.

4-12) اختبارات كيميائية حيوية تقليدية لتحديد المتفطرات                

اختبار إنتاج الصباغ: تتمتع الفطريات الفطرية بالقدرة على إنتاج أصباغ كاروتينويد بكميات وأنواع مختلفة حسب الأنواع. تبعا لذلک ، تنقسم الفطريات إلى ثلاث فئات: الفوتوكروموجين ، سكوتروكروجين وغير كروموجين. وقد لوحظ تقييم قدرة إنتاج الصباغ على المتفطرة واحدة.

المواد المسببة للضوء: هذه هي الفطريات التي تنتج مستعمرات مصطبغة في وجود الضوء. الميكوباكتيريوم كانساسي هو نوع من الفوتوكروموجين الذي ينتج صبغة صفراء.

سكرياتكروموجن: المتفطرات التي تنتج المستعمرات المصطبغة في وجود الضوء والظلام.

غير كروموجين: المتفطرات هي تلک التي لا يتأثر فيها إنتاج الصباغ بالضوء. السل المتفطرة هو نوع غير كرومي المنشأ.

4-13) اختبار التحلل المائي

يستخدم هذا الاختبار لعزل السلالات المسببة للأمراض التي غالبا ما يكون لها اختبار سلبي باستخدام اختبار المتفطرة الإيجابية.

4-14) تجربة اليوريا

إن قدرة بعض الميكوباكتريوم على تحلل اليوريا وإطلاق الأمونيا والماء مفيد في تحديد وعزل الأنواع من مركبات سكوتروكروجينية وغير الجراثيم.

4-15) اختبار النياسين

النياسين هو أحد فيتامينات B التي تنتجها جميع الفطريات. يفتقر عدد من أنواع الميكوباكتريوم مثل الميكوباكتري سيم والبكتريا السل إلى الإنزيم اللازم لتحويل النياسين إلى ريبونوكليوتيد. لذلک ، فإن تراكم النياسين في وسط الاستزراع مهم لتحديد أنواع المتفطرات، وخاصة السل المتفطرة.

4-16) اختبار بيرازيناميداز

الميكوباكتريوم بوفيس لديه مقاومة داخلية لبيرازيناميداز. الأنواع الحساسة لبيرازيناميداز مع إنزيم بيرازيناميداز تحوله إلى حمض البيرازينويک.

4-17) اختبار تحمل الملح

قدرة الفطريات على النمو في وجود 5 ٪ كلوريد الصوديوم أو التسامح يختلف. يمكن أن تنمو الفطريات الفطرية السريعة في الوسط المحتوي على 5٪ من كلوريد الصوديوم باستثناء mucogenicum M. معظم سلالات المستعمرات الفطرية قادرة أيضا على النمو في هذه البيئة .triviale M هو النوع الوحيد البطيء النمو والقادر على النمو في هذه البيئة.

4-18) اختبار الانتعاش نترات

يمكن لعدد من المتفطرات ، وخاصة المتفطرة السلية ، استعادة النترات إلى النتريت. يعد اختبار إنعاش النترات مفيدا للكشف عن الميكوباكتريوم القنب ، والميكروباتريا زولجاي والسل المتفطرة ، وكذلک بعض السلالات غير المرتبطة بالأمراض في الفوتوكروموجين. فتوکروموجونات و مایکروباکتریوم فوجیتوم و مایکروباکتریوم بویس و مایکروباکتریوم مالموئنسی و مایکروباکتریوم جیلونی إما سلبية أو إيجابية أو ضعيفة للغاية.

4-19) اختبار كاتالاز

الكاتلاز هو إنزيم داخل الخلايا قابل للذوبان يمكنه تحطيم بيروكسيد الهيدروجين في الماء والأكسجين. يشير وجود فقاعات في خليط التفاعل إلى اختبار إيجابي. تحتوي الفطريات على العديد من إنزيمات الكاتلاز التي تختلف في حساسية الحرارة.

4-20) الكاتلاز شبه الكمي

يعتبر اختبار الكاتلاز شبه الكمي ذا قيمة كبيرة في عزل بعض أنواع المتفطرات مایکوباکتریوم جاستری ، مایکوباکتریوم اوویوم کمبلکس ، مایکوباکتریوم مارینوم ، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، مایکوباکتریوم هموفیلوم، مایکوباکتریوم زنوبای ، مایکوباکتریوم بویس تنتج عمودا من فقاعات تقل عن 45 میلی لیتر.

4-21) اختبار آريل سلفاتاز

إنزيم أريل سلفاتاز يتحلل من الفينول فثالين كبريت ويحوله إلى فينول فثالين ، الذي ينتج اللون الأحمر في وجود بيكربونات الصوديوم. هناک مضادات انزيم أريل سلفاتاز.

4-22) نمو البكتيريا في درجات حرارة مختلفة

تختلف الفطريات في درجة حرارة نموها. ينمو أعضاء مجمع الميكوباكتيريوم عند درجات حرارة تتراوح من 35 إلى 37 درجات مئوية ، لكن الميكوباكتريا زنوبای تنمو فقط عند درجات حرارة من 42 إلى 44 درجات مئوية. لا تنمو أفضل درجة حرارة للنمو في الميكوباكتيريوم مارينوم عند 30 مئويتين وفي درجات حرارة أعلى من 33 درجة مئوية C. تنمو الفطريات الفطرية بشكل جيد عند درجات حرارة 42-25 درجة مئوية. تنمو الفطريات أيضا ببطء عند درجات حرارة 25 درجة مئوية. من أجل تحديد درجة حرارة نمو السلالة ، تم تلقيح السلالة في وسط ليفنشتاين جونسون وحضنت عند 45 ، 40 ، 37 ، 33 ، 30 ، 25 درجة مئوية.

4-23) مستعمرة التشكل

تباين مستعمرة الأنواع المتفطرة عبر الوسائط الصلبة. أعضاء مجمع الميكوباكتيريوم بطيء النمو ولديهم مستعمرات خشنة وجافة وعديمة اللون ، لكن مستعمرات NTM غالبا ما تكون ناعمة وسلسة.

4-24) حساسية هيدرازيد حامض الكربوكسيل

يستخدم هذا الاختبار لعزل الميكوباكتريوم بوفيس من المتفطرة السلية وغيرها من المتفطرات البطيئة النمو غير الفوتوكرومية. معظم سلالات الميكوباكتريوم بوفيس معرضة TCH بتركيزات  L/mg5-1. السل المتفطرة والبكتيريا الفطرية سلالات مقاومة TCH بتركيزات  L/mg5-1.

5) تقنيات جديدة في ميكوباكتريولوجي التشخيص               

استخدام الطرق التقليدية في تشخيص السل يتطلب وقتا طويلا. في السنوات الأخيرة ، بذلت جهود كثيرة لتوفير طرق وتقنيات التشخيص السريع ، بما في ذلک طرق التشخيص الجزيئي والأمصال والإشعاعي. على الرغم من جاذبية الطرق الجزيئية ، طالما لم يتم الوفاء بحساسية وخصوصية هذه التقنيات ، فإنها قد لا تكون بديلا قابلا للتطبيق للأساليب التقليدية.

5-1) طرق التشخيص الجزيئي

تحتل طرق التشخيص الجزيئي مكانا هاما في تقنيات التشخيص الحديثة نظرا لسرعتها العالية. تطبيق هذه التقنيات في أمراض مثل التهاب السحايا هام بشكل خاص. تعتمد مبادئ التشخيص في الطريقة الحالية على الخصائص المظهرية للبكتيريا الفطرية ، ولكن المحور الرئيسي للتشخيص في الطرق الجزيئية هو الخصائص الوراثية للكائنات الحية الدقيقة. لهذا الغرض ، تم تطوير عدة طرق لتضخيم الأحماض النووية في المختبر ، والتي نوقشت أدناه.

5-2) التعرف على أنواع المتفطرات وتحديدها استنادا إلى الطرق الجزيئية

لا يمكن التمييز بين العلامات السريرية للأمراض الناجمة عن الفطريات غير السل. عزل وتحديد الفطريات غير السلية ضروريان للتشخيص الواضح للعدوى الفطرية غير السلية وللمعالجة المناسبة لمثل هذه الالتهابات. تم التحقيق في العديد من العلامات لتحديد أنواع الميكوباكتيريوم ، الذي يلخص أدناه بعض هذه العلامات وقدرتها.

5-3) اختبارات تضخيم الحمض النووي

عن طریق ( NAATs) Nucleic acid amplification tests الكشف الجزيئي لكميات صغيرة من المادة الوراثية من الحمض النووي أو الحمض النووي DNA او RNA الريبي من الكائنات الحية الدقيقة عن طريق إمكانية التضخيم ، والذي ينطوي على تفاعل سلسلة البلمرة PCR او probe acid Nucleic. تزيد حساسية وخصوصية NAATs لعينات اللطاخ الموجبة عن 95٪ ، ولكن بالنسبة لعينات اللطاخ السلبي تكون الحساسية أقل. تعمل هذه الطرق كاختبارات تشخيصية تكميلية لتشخيص السل ، ولكنها ليست بديلا عن اللطاخة ابدا. هذه الطريقة المختبرية مفيدة للغاية لتشخيص التهاب السحايا السلي والانصباب الجنبي.

5-4) (Loop-mediated isothermal amplication (LAMP

الإيزوفورم هو طريقة سريعة وحساسة وبسيطة لتضخيم الأحماض النووية من خلال حلقة LAMP القادرة على تضخيم الحمض النووي المستهدف تحت الأشكال الإسوية واستخدام 6 إشعال محدد. في هذه الطريقة ، يتم استخدام 8 تمهيدي محدد يحدد تسلسلين متميزين على التسلسل الهدف مما يعزز خصوصية هذه التقنية وحساسيتها. على عكس PCR ، فإن تفاعل LAMP لا يتطلب دورة بالحرارة ويمكن تحقيقه باستخدام حاوية بن ماري أو سخان بسيط. هذا التفاعل قادر على إنتاج عدد كبير من النسخ في أقل من ساعة واحدة من نسخة واحدة من الحمض النووي ، وهو منتج قابل للتكرار بالعين المجردة دون الحاجة إلى رحلان كهربائي. ومع ذلک ، فإن القضية الرئيسية فيما يتعلق LAMP هي ارتفاع مخاطر المنتجات الثانوية والتلوث البيئي بسبب الكفاءة العالية لهذه الطريقة في التكاثر.

5-5) PCR based sequencing PCR

PCR إلى التسلسل هي واحدة من أكثر الطرق فعالية لتحديد المتفطرات. هذه الطريقة تنطوي على تضخيم الحمض النووي   DNAمع الاشعال الخاصة بالجنس. في هذه الطريقة ، تتم مقارنة تسلسل النيوكليوتيدات للكائن وتحديد التسلسل المرجعي. تحدد هذه الطريقة الأنواع التي لديها القدرة على النمو في المختبر. اليوم ، تم تحديد العديد من الأنواع الجديدة باستخدام هذه التقنية. التسلسل المستخدم هو جين الترميز S rRNA ، الموجود في جميع الأنواع البكتيرية ويحتوي على كل من المناطق المحفوظة والمتغيرة ، وهو أيضا هدف مثالي للتصنيف. في جنس المتفطرة ، يتم الحفاظ على تسلسل S rRNA بدرجة عالية. من الشائع بين جميع أعضاء هذا الجنس ، ومع ذلک ، يمكن أن تكون المناطق المتغيرة في هذا التسلسل مناسبة تماما للتمييز بين أنواع المتفطرة. من خلال الحصول على تسلسل S rRNA of لكل الفطريات ومقارنتها مع المتواليات المخزنة في قواعد البيانات الحالية ، يمكن للمرء أن يستنتج البكتيريا الفطرية. يتمثل التحدي الرئيسي المتمثل في استخدام جين S rRNA ژn في تحديد الأنواع في وجود مجموعات متغايرة الزيجوت الصغيرة بين الأوبرين rrm المختلفة في جينوم العزلة ، مما قد يجعل تحليل المعلومات مربكا للغاية. بالطبع ، هناک قيود على استخدام هذا الجين ، على سبيل المثال ، يحتوي المتفطره الکانزاسی على تسلسل مماثل للأنواع غير المسببة للأمراض من المتفطره جاستری. يعد HSP65 أحد جينات التدبير المنزلي الشائعة التي ترمز لبروتين الصدمة الحرارية 65 كيلو دالتون في الخلايا ، والتي تلعب مع الجينات الأخرى المشابهة وظيفيا دورا في التحكم في وظيفة الخلية أثناء صدمة الحرارة وغيرها من الضغوط البيئية. يعد بروتين الصدمة الحرارية أحد أهم مكونات مستضدات السطح في عدد من البكتيريا المسببة للأمراض بما في ذلک المتفطرة. أنواع المتفطرة لديها نسخة من الجين. يتم حفظ هذا الجين بشكل كبير في جنس المتفطرة.

أنواع المتفطرة ، وخاصة الأنواع سريعة النمو ، لها تشابه كبير على مستوى تسلسل الجينات.

لذلک ، يصعب تحديد هويتها الجزيئية في حالات مثل الأنواع التي تنتمي إلى مجمع الفطريات الفطرية. يبلغ طول جين rpoB أكثر من 300 نقاط أساس ولديه سبع مناطق متغيرة ذات قيمة عالية في تحديد الأنواع البكتيرية بما في ذلک المتفطرة. تستخدم dnaK ، rpoBC ، glpK ، murC في جينات أخرى لتحديد أنواع المتفطرات.

6-5) Real-Time PCR

بسبب دقة وسرعة وحساسية وإمكانات عالية في Real Time PCR ، يتم استخدام هذه الطريقة للكشف السريع عن البكتيريا ومقاومة العقاقير المضادة للميكروباتريا في العينات السريرية. وتستخدم تحقيقات مختلفة مثل تحقيقات TaqMan ، وتستخدم (FRET) fluorescence resonance energy   bioprobes. تتمثل المزايا الرئيسية لاستخدام هذه التقنية في انخفاض سرعة الاختبار ومخاطره ، ولكن المعدات باهظة الثمن والحاجة إلى موظفين فنيين مهرة هي ایضا عيوب.

7-5) ( High Resolution Melting (HRM

تهدف تقنية HRM إدارة الموارد البشرية إلى تحديد وفصل أنواع المتفطرة الشائعة بناء على الاختلافات في درجة حرارة ذوبان الجين المستهدف. في الواقع ، يشير تحليل إدارة الموارد البشرية إلى تقنية HRM تحليل شظايا الحمض النووي DNA، والتي تنطوي على تحديد دقيق للعلاقة بين درجة حرارة ذوبانها. يتم تنفيذ هذه التقنية باستخدام جهاز Real Time PCR.

 8-5) DNA Probe Hybridization 

DNA Probe Hybridization هي واحدة من أفضل طرق التشخيص الجزيئي لتحديد الكائنات الحية الحمضية السريعة. (Gen-Probe  ,San Diego , CA)Accuprobe هي طريقة محددة تعتمد على الحمض النووي DNA وتهجين إلى الرنا الريباسي rRNA، لتحديد عدد محدود من الفطريات ، بما في ذلک. يستخدم المتفطرة السلية، ميكوباكتريوم القنب، المتفطرة غوردونيوم. تم تقييم المجسات على نطاق واسع في محيط سريري وأظهرت حساسية عالية وخصوصية خلال ساعتين.

بشكل عام ، حساسية وخصوصية تحقيقات الحمض النووي DNA لعزل مجمع السل المتفطرة ، هي 99 ٪. لعزل مجمع المتفطرة الأفيونية ، الحساسية والنوعية هي 99 ٪ ، 95 ٪ ، على التوالي. نادرا ما تحدث تفاعلات متبادلة بين مسبار معقد السل المتفطرات وتحقيقات M. terrae و M. celatum و M. avium وكذلک الأنواع الموصوفة موخرا M. palustre و M. parascrofulaceum و M. saskatchewanense.

9-5) GeneXpert

تحدد طريقة GXpert (R) MTB / RIF في وقت واحد السل المتفطرة ومقاومة الريفامبيسين (RIF). ويستند هذا النظام في الوقت الحقيقي المتداخلة PCR. يساعد هذا النظام الأطباء في تشخيص المرض في أقل من 2 ساعات ويساعد في بدء العلاج في الوقت المحدد.

10-5) طرق التشخيص المصلية

تم وصف العديد من الاختبارات لتشخيص السل بناءً على نتائج استجابة مناعية المضيف للكائنات الحية الدقيقة المسببة. يعد اختبار جلد السل هو أقدم اختبار مناعي في تشخيص مرض السل. أكبر عيب في هذا الاختبار هو عدم قدرته على فصل الشكل النشط للمرض عن شكله غير النشط

11-5) اختبار الجلد PPD

عند تحفيز مناعة خلوية ضد السل المتفطرة ، فإن أي تعرض لاحق لهذه الكائنات الحية الدقيقة یودی إلى تفاعل فرط الحساسية المتأخر الموضعي (النوع الرابع من فرط الحساسية). یودی الحقن داخل جزيئات البروتين المستضدي من المتفطرة السلية (PPD) (مشتق من البروتين المنقى) إلى حدوث تورم واحمرار موضعي (في موقع الحقن) والجلد ، لذا فإن الحقن في الوريد من  Purified Protein Derivative ( PPD ) Derivative  يحدد ما إذا كان الشخص المصاب أو لم يصاب بمرض السل المتفطرات هذا الاختبار مهم لأن العديد من الأشخاص المصابين لا يظهرون أي علامات سريرية لعدة سنوات ، عندما يكون اختبار PPD إيجابيا ، يمكن علاج المرض والمرض قبله. الذي قام باستئصال الرئتين والأعضاء الأخرى بشكل كبير ، يتم تحديد اختبار PPD إيجابي مع منطقة صلبة يتم تحديد قطرة تزيد عن ۱۰mm بعد 48 فقط عندما يتطلب الأمر حدوث تفاعل فرط الحساسية من النوع الرابع ، في المرضى الذين يتم قمع أجهزة المناعة لديهم ، مثل المصابون بالإيدز بقطر 5mm. يشير إلى استجابة اختبار إيجابية لاحظ أن الاختبار الإيجابي لا يعني أن الشخص مصاب بمرض السل النشط ، بل يشير إلى التعرض لمرض السل الفطري والإصابة به في الماضي. اختبار إيجابي في المرضى الذين يعانون من العدوى النشطة والعدوى الخفية والأفراد المعالجين. يحدث أيضا.

الاختبار الإيجابي الخاطئ: يجب أن تظل حريصا على تفسير هذا الاختبار لأن بعض الأشخاص من البلدان الأخرى تم تطعيمهم باللقاح BCG (Bacillus Colmette – Guerin). هذا اللقاح فعال جدا في الوقاية من السل ولكنه يعطي استجابة إيجابية لاختبار PPD.

الاختبار السلبي الكاذب: هناک بعض الأشخاص الذين لا يستجيبون لمرض PPD على الرغم من إصابته بالسل. يصاب هولاء المرضى عادة بأوعية تمددية لأسباب مثل الستيرويدات وسوء التغذية والإيدز ونقص الاستجابة المناعية الطبيعية. لتحديد ما إذا كان شخص ما مصابا بمرض السل أو غير مصاب بالسل، فإننا نقوم بإجراء حقنة ثانية (مع مستضدات المبيضات أو اوریون) في ذراع الشخص الآخر. لقد تعرض الكثير من الاشخاص لهذه المستضدات ، لذلک فقط أولئک الذين يعانون من الحساسية لن يستجيبوا لحقن المبيضات بعد 48 ساعة من تصلب.

12-5)  IGRA فحص الدم لتشخيص المتفطرة السلية

تم إطلاق اختبار Assay Release Gamma Interferon Gamma Release Assay (IGRA) موخرا استنادا إلى فحص غاما للفيروسات لتشخيص السل وتمت الموافقة عليه من قبل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA). يتم تقييم مستضدات معينة من المتفطرة. يوجد حاليا طريقة IGRA لتقييم مستضدات منطقة تمايز الجينوم المتفطر (RD1) لتشخيص السل. تسمى الطريقة الأولى تردد الكم (QFT) الذي تقاس فيه كمية إنترفيرون غاما المفرز بخلايا T المنشطة. في الطريقة الثانية (SPOT-T) يتم حساب خلايا T المنشطة التي تفرز INF-INF. كلا الطريقتين معتمدتان من FDA. التردد الكمي (QFT) هو في الواقع طريقة غير مباشرة لتشخيص السل النشط وكذلک الكامنة. يعتمد اختبار QFT على منهجية بسيطة تعتمد على تحديد البروتينات العصوية. هذه البروتينات غائبة في BCG وغيرها من المتفطرات غير السل. لذلک ، فهي موشرات دقيقة للغاية للكشف عن العصيات. جعل استخدام البروتينات الخاصة بالعصيات هذا الاختبار محددا للغاية في تشخيص الأفراد المصابين بالسل.

13-5) التصوير بالأشعة

إن التشخيص النهائي لمرض السل ، وخاصة السل الرئوي ، هو ملاحظة أو عزل العصيات من عينة المريض. لذلک ، لا يلعب التصوير الإشعاعي دورا هاما في هذا التشخيص لأن أعراضا مماثلة تظهر في الأمراض. السل الرئوي لديه أيضا صورة إشعاعية مختلفة. من ناحية أخرى ، لا يمكن التمييز بين الأمراض النشطة والعدوى الكامنة بأعراض الإشعاع. ولكن في حالات مثل السل في الأطفال والشباب المصابين بالسل الرئوي خارج الأوعية ، يمكن أن تكون الأشعة مفيدة.

6) اختبارات مقاومة المخدرات                      

واحدة من أهم مهام مختبرات الفطريات المركزية هي إجراء اختبارات مقاومة الأدوية. تلعب المضادات الحيوية دورا هاما في تقييم وانتشار مقاومة الأدوية في منطقة ما ، و کذلک في السيطرة على الأمراض الفطرية ، وفي حالة حدوث مقاومة للأدوية ، فإن تعديل نظام الدواء في عملية العلاج وإنتاج أدوية فعالة جديدة. يعتمد مبدأ المضاد الحيوي على مفاهيم تركيز المثبطة الأدنى MIC (Minimal inhibitory Concentration)  والتركيز الأدنى للجراثيم MIC (Minimal inhibitory Concentration). يحدد هذا الاختبار مقاومة الفرد للأدوية المضادة للسل. اختبار مقاومة العقاقير ينطوي على زراعة بكتيريا السل في وجود عقاقير مضادة للسل. إذا كانت البكتيريا تنمو ، فهذا يعني أن البكتيريا مقاومة للعقاقير. ولكن إذا لم تنمو البكتيريا ، فهذا يعني أن الأدوية فعالة والبكتيريا ليست مقاومة لهم. في اختبار قابلية الدواء غير المباشر ، يتم تلقيح مجموعة من المواد التي تحتوي على المخدرات في وقت واحد وبشكل مباشر في ثقافة نقية للعينة. تعرف التجارب غير المباشرة الآن باختبارات حساسية الأدوية القياسية. على الرغم من حساسية وخصوصية هذه الاختبارات (زراعة وتحديد عامل السل المتفطرات) ، فإن المشكلة الرئيسية هي طول الوقت والمعدات اللازمة لهم.

6-1) إجراء اختبار الحساسية المخدرات

– طريقة مباشرة

في المناطق التي تكون فيها مقاومة الأدوية شائعة ، يمكن إجراء اختبارات حساسية الدواء بالطريقة المباشرة. لا تنصح منظمة الصحة العالمية بإجراء اختبار حساسية الدواء المباشر بسبب اختبارات التكرار غير المباشرة.

– طرق غير مباشرة

1- طريقة نسبة المقاومة (Resistance ratio Method)

2- طريقة التركيز المطلق ( Absolute concentration Method)

3- طريقة انتشار القرص دیفیوجین (Disc Diffusion Method)

4- طريقة قياس الإشعاع (Radiometric Method)

5- الطريقة النسبية (proportial Method)

6-2) طريقة نسبة المقاومة ( (Resistance ratio Method(RR)

يتم استخدام هذه الطريقة بشكل شائع في المملكة المتحدة ، والدواء MIC لسلالة الاختبار والسلالة القياسية التي يتم تحديدها في وقت واحد. ثم يتم تقسيم MIC للسلالة المختبرة إلى MIC للسلالة القياسية وحساب نسبة المقاومة. إذا كان RR يساوي أو يزيد عن (RR≥۴) ، فإن السلالة المختبرة تعتبر مقاومة ، حيث يكون تركيز المضادات الحيوية للسلالة المختبرة مختلفًا عن السلالة القياسية.

6-3) طريقة التركيز المطلق

هذه الطريقة تشبه إلى حد كبير طريقة نسبة المقاومة وليس لها ميزة عليها. طريقة التركيز المطلق

يتم استخدامه في بعض الدول الأوروبية وقد تم تصميمه بطرق آلية.

6-4) طريقة التركيز المطلق مع طريقة میکرودایلوشن

يمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد مختلف MICs للمضادات الحيوية لجميع المتفطرات ، بما في ذلک المتفطرة السلية. بسبب التعكر، تتم مقارنة معدلات نمو البكتيريا في الآبار مع آبار التحكم. في هذه الطريقة ، فإن MIC هو أقل تركيز للأدوية حيث لا توجد عتامة يمكن اكتشافها في ذلک.

6-5) طريقة نشر القرص دیفیوجین

تم استخدام طريقة نشر القرص الأولى لتقييم مقاومة العصيات لمرض السل ضد الإيزونيازيد والستربتومايسين. في هذه الطريقة ، يتم وضع أقراص ورقية مشربة بالمضادات الحيوية على الوسائط في أطباق بتري التي تم تلقيحها سابقًا بالسلالات القياسية. كمية المضادات الحيوية الموجودة في القرص هي 5 أضعاف الكمية المطلوبة في الوسط للحفاظ على الدواء في المتوسط ​​دون التركيز المطلوب. الوسيلة الأكثر استخداما هي ۷H11.

6-6) طریقه القیاس اللاسلکی

طريقة القياس اللاسلكي هي الطريقة الجديدة المستخدمة في نظام الخلفية. تستخدم هذه الطريقة بشكل شائع في الولايات المتحدة لجميع الأدوية المضادة للسل.

في نظام العمود الفقري ، يتم إجراء المضادات الحيوية عن طريق إضافة مساحيق مجفف بالتجميد إلى الوسط B12. عيوب هذه الطريقة هي وجود المواد المشعة وحدوث التلوث. إذا كان معدل نمو السلالة التي تم اختبارها في المضادات الحيوية التي تحتوي على المتوسط ​​أكبر من 1٪ ، تكون السلالة مقاومة.

6-7) الطريقة النسبية

تتم مقارنة الطريقة النسبية لمعدل نمو الإجهاد في البيئات التي تحتوي على مضادات حيوية مع الوسائط بدون المضادات الحيوية. إذا كان معدل النمو البكتيري في البيئات التي تحتوي على مضادات حيوية أكبر من 1 ٪ دون استخدام المضادات الحيوية ، تعتبر السلالة مقاومة. الطريقة النسبية بسيطة ومعتمدة من قبل منظمة الصحة العالمية.

6-8) (Epsilometer test (E-TEST

يعد E-TEST أحد الأساليب الأخرى المستخدمة موخرا لتحديد مقاومة البكتيريا للعقاقير ، بما في ذلک المتفطرة. يتكون E-TEST من شريط بتركيزات مختلفة من الدواء ، حيث يتم تثبيط المضادات الحيوية الموجودة في الشريط في وسط الثقافة الملقح بالعصيات المنبعثة وتثبط نمو البكتيريا. يتم قياس MIC بأقل تركيز للعقار يمنع نمو البكتيريا.

الموارد المميزة:

مبادئ علم الفطريات – تأليف عبد الناصر رفیع ، رضا مودب

Woods GL. Susceptibility testing of mycobacteria, nocardiae, and other aerobic actinomycetes. Approved Standard M24-A2.  no. 5 (2011).

List of prokaryotic names.http://www.bacterio.net/mycobacterium.html

Tortoli E. Microbiological features and clinical relevance of new species of the genus Mycobacterium. Clinical microbiology reviews. 2014;27(4):727-52.

يمكن للعزاء الذين يعيشون في أهواز،يمكنهم استخدام مختبر للباثولوجیا في الأهواز مع أفضل المرافق والتكنولوجيا في اليوم لأي نوع من التجارب.

بفضل إدارة موقع مختبر الأهواز – باستور

Leave a Reply

عشرين + واحد =









Call Now Button