الكشف عن الأليلات (HLA-A) HLA-B و HLA-DR (96) HLA-DR بواسطة الطريقة الجزيئية

الكشف عن الأليلات

حاليا ، تقدمت معرفتنا لنظام HLA بشكل كبير بحيث يمكن توصيف HLA عن طريق التحليل الجيني.

الكشف عن الأليلات (HLA-A) HLA-B و HLA-DR (96) HLA-DR بواسطة الطريقة الجزيئية

تستخدم الآن الأساليب الجزيئية مثل تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) لتحديد MHCs. في طريقة تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) ، يتم استخدام أجزاء محددة من البادئ النيوكليوتيد (primers) من نهاية الإكسونات تشفير المناطق متعددة الأشكال من جزيئات الصنف الأول أو الثاني من معقد التوافق النسيجي الكبير لتضخيم هذه المناطق ثم تحليلها. وهكذا ، وبهذه الطريقة ، يمكن تحديد تسلسل النوكليوتيدات من الأليلات المختلفة من جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير بدقة أكبر واستخدامها في تقييم القدرة على التكيف مع الأنسجة في عمليات زرع الأعضاء. في طريقة HLA Typing ، يتم إجراء عدة تجارب في وقت واحد على عينة باستخدام SSP-PCR.

كل من هذه التجارب يفحص وجود أو عدم وجود تعدد الأشكال باستخدام بادئات محددة للتسلسل لكل الأليل (SSP). باستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل ، يتم إنتاج عدة إصدارات من مناطق الحمض النووي المستهدفة والخاصة في الكروموسوم 6 ، والتي تحتوي على متواليات تشفر أليلات HLA. يعتمد هذا النظام على عدم وجود نشاط نسيجي خارجي 5 اتجاه 3 إنزيمات DNA المستخدمة في تفاعل البلمرة المتسلسل Taq

باستخدام هذا الإنزيم ، يحدث الازدواج عندما تكون هذه الاشعال يمكن أن تقترن تمامًا وبدقة بالتسلسلات المرتبطة بالأليل. استخدام بادئات محددة لتسلسل الأليلات يؤدي إلى الكشف المباشر تعدد الأشكال على الاطلاق.

لتنفيذ HLA Typing باستخدام طريقة SSP ، من الضروري إجراء عدة تفاعلات في وقت واحد. على سبيل المثال ، هناك ما لا يقل عن 96 تفاعلات لتحديد الأليلات HLA-A و B و DRB1. هناك أيضا ضوابط لتجنب الأخطاء الإنجابية والنتائج السلبية الكاذبة التي تتكاثر بها هذه البادئات في كل تفاعلات شديدة الجينات المحمية (غالباً هرمون النمو البشري).

يتم الكشف عن المنتج من هذه الاشعال السيطرة الداخلية ببساطة عن طريق الكهربائي على هلام الاغاروزومن ثم تلطيخ بروميد الإيثيديوم في نهاية المطاف بواسطة ضوء الأشعة فوق البنفسجية. لا يوجد تكاثر إذا لم يكن هناك تسلسل تكميلي للبرايمر المستخدم ولا توجد ضمادة عند فحص الجل. وأخيرا ، يتم تفسير النتائج من خلال مقارنة نماذج التفاعل يدويا أو باستخدام برامج الكمبيوتر المصممة خصيصا لكل اختبار.

الكشف عن الأليلات (HLA-A) HLA-B و HLA-DR (96) HLA-DR بواسطة الطريقة الجزيئية

الكشف عن الأليلات (HLA-A) HLA-B و HLA-DR (96) HLA-DR بواسطة الطريقة الجزيئية

هذا هو أسرع نظام للحصول على HLA Typing باستخدام التقنيات الجزيئية وهو متاح على نطاق واسع في أي لحظة. وذلك من قبول العينة لتفسير صورة الهلام مع الطرق القائمة على الحمض النووي  او  DNAمن حوالي 3/5 ساعة في الطول يقود. في المستقبل ، قد يتم استبدال ذلك بطرق Real time PCR التي تتطلب تحليل المنتجات باستخدام الجل. لكن PCR-SSP لا يزال الطريقة الأسرع على أساس الحمض النووي  او DNA، في معظم مراكز  HLA Typing هم.

الموارد المختارة:

–        DNA METHODS FOR HLA TYPING A WORKBOOK FOR BEGINNERS

–        Abbas A, Lichtman A: cellular and molecular Immunology, fifth edition, 2003

–        WWW. en.wikipedia.org

Leave a Reply









Call Now Button